牛肉膏3.0 g
蛋白胨10.0g
NaCl5.0g
水1000mL
pH7.4~7.6
高氏I号培养基配方
可溶性淀粉20g
NaCl0.5g
KNO31g
K2HPO4?3H2O0.5g
MgSO4?7H2O0.5g
FeSO4?7H2O0.01g
琼脂15—25g
水1000mL
pH7.4~7.6
马铃薯培养基配方
马铃薯(去皮)200g
葡萄糖(或蔗糖)20g
琼脂15~25g
水1000ml
自然pH
察氏培养基配方
蔗糖30g
NaNO32g
K2HPO41g
KCl0.5g
MgSO4?7H2O0.5g
FeSO4?7H2O0.01g
琼脂15~25g
蒸馏水1000ml
自然pH
实验器材
牛肉膏 , 蛋白胨 , NaCl , 琼脂 , 1mol/LNaOH, 1mol/LHCl , KNO3 , K2HPO4?3H2O , MgSO4?7H2O , FeS04?7H2O , 马铃薯 , 蔗糖等 。
试管 , 三角瓶 , 烧杯 , 量筒 , 玻棒 , 培养基分装器 , 天平 , 牛角匙 , pH试纸(pH 5.5~9.0) , 棉花 , 牛皮纸 , 记号笔 , 麻绳 , 纱布等 。
实验步骤
1.牛肉膏蛋白胨培养基配制方法
(1) 称量:按培养基配方比例依次推确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCL放人烧杯中 。牛肉膏常用玻棒挑取 , 放在小烧杯或表面皿中称量 , 用热水溶化后倒入烧杯 , 也可按在称量纸上 , 称量后直接放入水中 , 这时如稍微加热 , 牛肉膏便会与称量纸分离 , 然后立即取出纸片 。
蛋白胨很易吸湿 , 在称取时动作要迅速 。另外 , 称药品时严防药品混杂 , 一把牛角匙用于一种药品 , 或称取一种药品后 , 洗净 , 擦干 , 再称取另一药品 。瓶盖也不要盖错 。
(2) 溶化:在上述烧杯中先加入少于所需要的水量 , 用玻棒搅匀 , 然后 , 在石棉网上加热使其溶解 。将药品完全溶解后 , 补充水到所需的总体积 , 如果配制固体培养基时 , 将称好的琼脂放入己溶的药品中 , 再加热溶化 , 最后补足所损失的水分 。
在琼脂溶化过程中 , 应控制火力 , 以免培养基因沸腾而溢出容器 。同时.需不断搅拌.以防琼脂糊底烧焦 。配制培养基时 , 不可用铜或铁锅加热溶化 , 以免离子进入培养基中 , 影晌细菌生长 。
(3) 调pH
在未调pH前 , 先用精密pH试纸测量培养基的原始pH , 如果偏酸 , 用滴管向培养基中逐滴加入1mol/LNaOH,边加边搅拌 , 并随时用pH试纸测其pH , 直至pH达7.6 。反之 , 用mol/LHCL进行调节 。
对于有些要求pH较精确的微生物 , 其pH的调节可用酸度计进行 。
pH不要调过头 , 以避免回调而影响培养基内各离子的浓度 。配制pH低的琼脂培养基时 , 若预先调好pH并在高压蒸气下灭菌 , 则琼脂因水解不能凝固 。因此 , 应将培养基的成分和琼脂分开灭菌后再混合 , 或在中性pH条件下灭菌 , 再调整PH 。
(4) 过滤
趁热用滤纸或多层纱布过滤 , 以利某些实验结果的观察 。一般无特殊要求的情况下可以省去(本实验勿需过滤) 。
(5) 分装
按实验要求 , 可将配制的培养基分装人试管内或三角烧瓶内 。
1) 液体分装:分装高度以试管高度的l/4左右为宜 。分装三角瓶的量则根据需要而定 , 一般以不超过三角瓶容积的一半为宜 , 如果是用于振荡培养用 , 则根据通气量的要求酌情减少;有的液体培养基在灭菌后 , 需要补加一定量的其他无菌成分 , 如抗生素等 , 则装量一定要准确 。
2) 固体分装:分装试管 , 其装量不超过管高的1/5 , 灭菌后制成斜面 。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜 。
3) 半固体分装:试管一般以试管高度的1/3为宜 , 灭菌后垂直待凝 。
图1-1 培养基的分装
A 漏斗分装装置 ;B 自动分装装置
1 铁架 ;2 漏斗 ;3孔胶管 ;4弹簧夹 ;5玻璃 ;6流速调节 ;7 装量调节 ;8开关
分装过程中 , 注意不要使培养基沾在管(瓶)口上 , 以免沾污棉塞而引起污染 。
(6) 加塞
图1-2棉塞的制作
培养基分装完毕后 , 在试管口或三角烷瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞及试管帽等) , 棉塞的作用有二:一方面阻止外界微生物进入培养基 , 防止由此而引起的污染;另一方面保证有良好的通气性能 , 使培养在里面的微生物能够从外界源源不断地获得新鲜无菌空气 。因此棉塞质量的好坏对实验的结果有着很大的影响 。一只好的棉塞 , 外形应象一只蘑菇 , 大小、松紧都应适当 。加塞时的棉塞的总长度的3/5应在口内 , 2/5在口外 。
- 临朐县冶源友谊瓶盖厂怎么样?
- 蚂蚁呀嘿怎么制作 抖音蚂蚁呀嘿特效怎么弄?
- 赛尔号迈尼斯怎么打
- bedook去痘印怎么样
- 网络被人arp攻击怎么办?
- 手机腾讯视频找不到选集了怎么办?
- 洗手池的污垢怎么清理
- 洗完空调后漏水怎么办
- 夹生饭怎么办
- 铝合金暖气片怎么样